上海波泰生物科技有限公司
Shanghai Bootech BioScience &Technology Co.,Ltd.
頂部菜單

    電話:    021- 64975089
              021- 54360855
              021- 58930063
              021- 64705880
    免費熱線:800-820-8061
    傳真:    021-5435 0721
    電子信箱:[email protected]
              [email protected]
    在線QQ:   651698090
    網址:     内部透码彩票彩图 www.sbwgr.com
    地址:    上海市浦東新區共平路
              996號5號廠區
    郵編:    200237

聯系我們
dc
           ·   網站首頁
           ·   企業概況

           ·   多肽合成

           ·   多肽修飾

           ·   多肽產品

           ·   相關產品

           ·   質量監控

           ·   相關資料

           ·   人才招聘

           ·   聯系我們

導航欄目
dc
一次訂單超過20條均可以免費贈送1條,批量訂購優惠幅度大,本月促銷中...醋酸戈舍瑞林.醋酸亮丙瑞林.胸腺肽α1.醋酸亮丙瑞林.醋酸奈西立肽.熱銷中..
ISO:2001質量管理體系認證
as
?
 

文章已發表-活性多肽IKVAV納米纖維凝膠的自組裝

發布者::admin   發布時間: :2012-04-25 10:19 瀏覽次數: :

113期内部透码(信封)图:活性多肽IKVAV納米纖維凝膠的自組裝及其生物相容性檢測

吳永超 ?鄭啟新 ?宋玉林 ?杜靖遠 ?吳斌 ?
【摘要】:目的:合成神經活性多肽IKVAV(isoleucine-lysine-valine-alanine-valine,異亮氨酸-賴氨酸-丙氨酸-纈氨酸)多肽兩親性分子,在體外進行自組裝成為納米纖維,并且初步檢測其生物相容性。方法:實驗于2005-12/2006-03在華中科技大學附屬協和醫院骨科實驗室完成。①IKVAV多肽兩親性分子委托上海波泰生物科技公司合成,并用高效液相色譜儀和質譜儀進行純化和分析。②IKVAV納米纖維凝膠自組裝:分別取200μL10,5和2.5g/LIKVAV兩親性分子(IKVAVPeptide-AmpHipHile,IKVAV-PA)溶液置入小玻璃瓶中,分別加入等體積的含有
【作者單位】: 華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院骨科 華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院骨科 華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院骨科 華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院骨科 華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院骨科
【關鍵詞】肽類 自組裝 納米技術 生物相容性材料
【基金】:國家自然科學基金資助(30500511)~~
【分類號】:R318.08
【正文快照】:
0引言脊髓神經損傷是嚴重影響患者生活質量并且給社會帶來嚴重經濟負擔的疾病。神經組織工程給脊髓損傷的治療帶來了希望。神經組織工程將神經細胞種植于適宜的生物材料后,移植到受損脊髓中,可達到修復被破壞的神經組織的目的。但是,神經組織工程研究面臨著一個亟待解決的問題

内部透码彩票彩图 www.sbwgr.com 生物工程學報 Chin J Biotech 2009, February 25; 25(2): 292-298
journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061
[email protected] ? 2009 Institute of Microbiology, CAS & CSM, All rights reserved
Received: August 14, 2008; Accepted: November 13, 2008
Supported by: the National Natural Science Foundation of China (No. 30500511).
Corresponding author: Yongchao Wu. E-mail: [email protected]
國家自然科學基金項目(No. 30500511)資助。
組織工程與細胞培養
自組裝IKVAV 多肽納米纖維支架凝膠及其對嗅鞘細胞
的作用
徐會法, 邵增務, 吳永超, 鄧超, 俞旭東, 丁凡, 張保龍, 徐蔚蔚
華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院骨科, 武漢 430022
摘 要: 旨在觀察自組裝IKVAV 多肽納米纖維支架凝膠對鼠嗅鞘細胞(OECs)的作用。通過調整IKVAV 溶液pH 值并加
入培養液觸發多肽自組裝為支架凝膠, 用原子力顯微鏡檢測IKVAV 分子可以自組裝成編織狀納米纖維(直徑為3~5 nm)。
采用原代分離培養方法獲得OECs 單細胞懸液后, 使用差速貼壁法兩次純化OECs 且在第12 天通過免疫染色計數OECs
純度為85%。將IKVAV 多肽納米纖維支架凝膠與OECs 復合培養, 倒置顯微鏡下觀察OECs 生長良好, Calcein-AM/PI
活、死細胞染色表明活細胞數達95%。CCK-8 法間接細胞計數證實IKVAV 多肽可促進OECs 的黏附, 對OECs 增殖沒
有影響。由此可見IKVAV 多肽可以自組裝成納米纖維支架凝膠且對OECs 有良好的生物相容性及黏附作用, 可作為神
經組織工程支架材料。
關鍵詞: 納米纖維, 組織工程, 自組裝, 嗅鞘細胞
Effects of self-assembled IKVAV peptide nanofibers on
olfactory ensheathing cells
Huifa Xu, Zengwu Shao, Yongchao Wu, Chao Deng, Xudong Yu, Fan Ding, Baolong Zhang,
and Weiwei Xu
Department of Orthopaedics, Union Hospital, Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430022, China
Abstract: We observed the effects of IKVAV self-assembling peptide nanofiber scaffold (SAPNS) on olfactory ensheathing cells
(OECs). The IKVAV molecules were triggered to self- assemble to interconnected nanofibers hydrogel by adjusting pH of solution
and adding of DMEM/F12 culture medium. Atomic Force Microscopy (AFM) showed that self-assembly hydrogel was consisted of
the interconnected nanofibers, which varied from three nm to five nm in diameter and hundreds nanometer in length. The primary
OECs were isolated from rat olfactory bulb and purified by differential adhesion twice. At days 12, the purity of OECs was 85%
according to immunostaining of P75 NGFR antibody. OECs were cultured with IKVAV peptide. The adhesion, viability and
proliferation of OECs were observed with inverted microscope, Calcein-AM /PI staining and Cell Counting Kit-8. OECs cultured on
IKVAV SAPNS grew well and the viable cell count was 95%. IKVAV SAPNS can promote the adhesion of OECs and did no hinder
the proliferation of OECs. IKVAV SAPNS nanofiber gel has good biocompatibility and bioactivity for OECs. It can serve as a good
nerve tissue engineering scaffold.
Keywords: nanofiber, tissue engineering, self-assembly, olfactory ensheathing cells
徐會法等: 自組裝IKVAV 多肽納米纖維支架凝膠及其對嗅鞘細胞的作用 293
Journals.im.ac.cn
脊髓損傷(Spinal cord injury, SCI)的發病率隨著社會的發展而逐年增高, 往往導致大部分肢體癱瘓,
給個人、家庭及社會帶來極大痛苦與負擔,因此一直是骨科等研究的重點和難點, 上世紀末興起的神經組織工程被公認為治療脊髓損傷非常有前景的方法, 這包括3 個主要的內容: 種子細胞、支架材料和各種生長因子提供的內環境。傳統支架材料普遍存在機械強度高、生物降解性差、降解物具有毒性、易產生免疫反應及無生物學活性等缺點, 限制了它們在中樞神經組織工程的應用[1], 為此需要尋找一種新的支架材料作為修復載體治療SCI。多肽自組裝納米纖維材料因為具有良好的生物相容性和生物活性成為生物支架材料發展的一個非常重要的方向。前期實驗設計和合成了層粘連蛋白中的活性多肽片段IKVAV(Ile-Lys-Val-Ala-Va1)的自組裝納米纖維材料[2], 并證實其對PC12 細胞和神經干細胞具有良好的生物相容性, 并能促進其粘附和分化[3?7]。嗅鞘細胞(OECs)也是治療脊髓損傷最有前景細胞之一。本實驗為OECs 與IKVAV 多肽納米纖維支架復合的細胞假體應用于脊髓損傷治療的可行性提供實驗依據。
1 材料和儀器
1 周齡SPF 級SD 大鼠(購于華中科技大學同濟醫學院實驗動物中心), IKVAV 多肽兩親性分子(委托上海波泰生物科技公司合成, 用高效液相色譜儀和質譜儀進行純化和分析, 相對分子質量為1351.6,純度為98%), DMEM/F12 培養基, 胎牛血清(Gibco公司), 多聚賴氨酸(Poly-L-Lysine, PLL), 0.125%胰酶(Sigma 公司), 牛垂體提取液(Bovine pituitaryextract BPE, Invitrogen 公司), Forskolin(福斯高林Sigma 公司)CCK-8 試劑盒(Cell counting kit-8, 上海同仁化學研究所), P75 NGFR 抗體, SABC 試劑盒(博士德公司)寶特 Elx-808 酶標儀(Bio-Tek, Elx-808 型,USA), 倒置顯微鏡(OLYMPUSCKX41-F32FL), 原子力顯微鏡(Atomic Force Microscopy, JEM-1230)。2 方法
2.1 IKVAV 活性多肽自組裝為納米纖維支架取10 mg 的IKVAV 兩親性分子加入400 μL 無菌的0.1 mol/L NaOH 和400 μL 雙蒸水放置在37oC、30 min, 振蕩后溶解成為澄清液體, 逐加入
10 μL 0.1 mol/L HCl 緩慢調整多肽溶液pH 值至8.5,加入無菌雙蒸水使使總體積為1 mL, 濃度為1%(W/V), 此時可見多肽溶液呈粘稠液態, 取多肽溶液200 μL, 加入200 μL 含有二價陽離子的DMEM細胞培養基溶液引發自組裝[8]。2.2 組織取材及細胞培養純化并鑒定無菌條件下, 取出10 只7 d 的SPF 級SD 大鼠嗅球, 解剖顯微鏡下仔細剝除嗅球表面的微血管及軟腦膜, 將整個嗅球剪碎至直徑0.5 mm 的組織塊,加入0.125% 胰蛋白酶37oC 消化15 min, 含10%FBS 的培養液終止消化10 min, 吹打20 次至細胞懸液, 1000 r/min 離心5 min 吸除上清液, 加入培養液(DMEM/F12 培養基, 10% FBS, 牛垂體提取液20 mg/L, Forskolin 20 μmol/L)重懸細胞, 小心將細胞懸液轉移至培養瓶中, 于37oC、5% CO2 培養箱中培養20 h 后細胞懸液轉移至另一培養瓶中, 重復1次。取一塊24 孔板, 在中間8 孔內每孔放入一塊經PLL 處理的蓋玻片, 在每孔內加入約1 mL 細胞懸液,細胞濃度為1×105 于37oC、5% CO2 培養箱中培養,每3 d 換液, 以觀察細胞形態并用P75 NGFR 特異性抗體作免疫組化染色鑒定OECs 細胞[9]。2.3 IKVAV 多肽材料與OECs 的生物相容性檢測用濃度為30 mg/L 的多肽溶液包被蓋玻片, 放入24 孔板中, 將OECs 細胞調整至5× 105/mL, 接種于多肽包被的蓋玻片上。同時接種于濃度為0.1 mg/mL 的多聚賴氨酸包被的蓋玻片作為對照,將培養7 d 和12 d 的蓋玻片取出, PBS 沖洗3 次, 加入終濃度為4 μmol/L 的 Calcein-AM 和20 μmol/L的PI 進行活死細胞染色, 37oC 孵育30 min 后PBS沖洗3 次, 甘油封片, 激光共聚焦顯微鏡下觀察活、死細胞情況。2.4 IKVAV 多肽對OECs 的毒性和增殖的影響取2 塊96 孔板, 將細胞懸液接種于板內, 每板接種60 孔, 每孔100 μL 細胞懸液, 置于37oC、5%CO2 及飽和濕度孵育箱中培養, 2 d 后換液。將其分為6 組, 1 個對照組5 個實驗組, 每組10 孔, 前3 孔作空白對照。對照組為A 組加入不含IKVAV 多肽的
培養液(A 組DMEM/F12 培養基+10% FBS+牛垂體提取液20 mg/L+Forskolin 20 μmol/L)。5 個實驗組分別為B 組、C 組、D 組、E 組和F 組, 每組加入含不294 ISSN1000-3061 CN11-1998/Q Chin J Biotech February 25, 2009 Vol.25 No.2Journals.im.ac.cn同濃度的IKVAV 多肽納米纖維支架的培養液(DMEM/ F12 培養基+10% FBS+牛垂體提取液20 mg/L+Forskolin 20 μmol/L+IKVAV), 其濃度分別為320、160、80、40 和20 mg/L。分別于3 d 和7 d 取出1 塊96 孔板, 加入細胞毒性/增殖檢測試劑CCK-810 μL, 避光放入37.0oC 培養箱中培養4 h, 取出用
酶標儀測吸光度值, 激發光波長為450 nm。2.5 IKVAV 多肽對OECs 的粘附率的影響取4 塊96 孔板, 分為1 個對照組(A 組)和5 個實驗組(B、C、D、E 和F 組), 分別用無菌雙蒸水配制濃度為0、10、20、40、80、160 mg/L 的IKVAV兩親性分子, 分別加入到4 個預先用PLL 包被的96孔板中, 每孔加入30 μL 不同濃度的IKVAV 溶液。將96 孔板放入37.0oC 溫箱中包被過夜, 然后放入超凈工作臺中吹干。96 孔細胞培養板的每一個孔的底面積為0.32 cm2, 所以A 至F 組的培養板中IKVAV 的密度分別為0、0.99、1.88、3.76、7.52、15.0 μg/ cm2 用磷酸鹽緩沖液洗96 孔板3 次, 每次5 min。用培養液調整細胞濃度為6×108/L, 加入到上述用不同濃度的IKVAV 包被的4 個96 孔細胞培養板, 每孔加入細胞懸液100 μL, 含有6×104 個細胞。為了計算細胞黏附率并對比8 h、13 h、18 h 和23 h的細胞黏附, 設標準組1 個(G 組), 在上述4 個培養板分別取6 孔, 加入含有6×104 個OECs 細胞的細胞懸液100 μL, 標準組含有100%的細胞數。將4 個上述加入OECs 細胞的培養板放入37oC、5% CO2 飽和濕度的培養箱中, 分別培養8、13、18 和23 h。 8 h時各實驗組和標準組稱為A8、B8、C8、D8、E8、F8 和G8, 13 h 時各實驗組和標準組稱為A13、B13、C13、D13、E13、F13 和G13, 以此類推。除了標準組(G8、G13、G18 和G23 組)外, 吸出各組中的細胞培養基, 每孔用磷酸鹽緩沖液均勻沖洗孔壁, 然后
吸出磷酸鹽緩沖液。重復磷酸鹽緩沖液沖洗2 次。OECs 細胞黏附檢測: 本實驗通過細胞活性檢測試劑CCK-8 間接檢測細胞數量, 并計算細胞黏附率。在上述培養液中加入細胞活性檢測試劑CCK-8 溶液,比例為10:1。除了標準組外, 每孔中加入上述培養液/CCK-8 溶液110 μL, 標準組中每孔直接加入純CCK-8 溶液10 μL, 避光放入37oC 培養箱中培養4 h取出用酶標儀讀取吸光度值, 激發光波長為450 nm,將各實驗組的平均值和標準組的平均值相除, 得到各實驗組的細胞黏附率。2.6 統計學處理全部數據用均數±標準差表示, 采用SPSS 13.0軟件對數據進行統計學分析, 兩組數據比較采用兩獨立樣本t 檢驗, P<0.05 表示有顯著性差異。3 結果
3.1 自組裝凝膠的鑒定原子力顯微鏡觀察顯示含IKVAV 活性部位的多肽溶液在DMEM 觸發下自組裝為凝膠, 凝膠為編織狀納米纖維, 纖維直徑為3~5 nm, 長度為數百納米, 納米纖維之間可交織形成網狀結構, 纖維間有較大空隙(圖1)。
圖1 IKVAV 自組裝后原子力顯微鏡檢測IKVAV 納米纖維
Fig. 1 Atomic Force Microscopy (AFM) testing of nanofibers.
AFM showed that self-assembly hydrogel was consisted of the
interconnected nanofibers, which varied from 3 nm to 5 nm in
diameter and hundreds nanometer in length. Scale bar=0.2 μm.
3.2 OECs 的形態觀察及免疫染色鑒定種植24 h 后可見大量細胞存活, 突起短, 胞體大, 散在生長。第3 天(圖2), 細胞立體感強、透亮,突起細長輪廓清晰、立體感強, 其中以對稱突起的雙極細胞為主, 其胞體呈長梭形, 細胞核位于中央亦呈梭形, 三極細胞有3 個突起, 胞體呈三角形, 細胞核位于中央亦呈梭形, 兩者共同的明顯特點是突起細長。7 d 時(圖3)OECs 細胞密度增加, 胞體較亮,其突起為雙極或三極, 突起變長; 背底有成纖維細胞存在, 胞體較大、扁平, 其立體感、折光性較差,至l2 d, 細胞更加密集, 細胞胞體突起呈現平行排列,P75 NGFR 免疫細胞化學染色結果(圖4)OECs 純度為85%。
徐會法等: 自組裝IKVAV 多肽納米纖維支架凝膠及其對嗅鞘細胞的作用 295Journals.im.ac.cn
圖2 OECs 純化后3 d 倒置顯微鏡觀察(×200)Fig. 2 Inverted Microscopy observation of OECs after threeday (×200). The cells and Its slender process have very intensestereoscopic sense.圖3 OECs 純化后7d 倒置顯微鏡觀察(×200)Fig. 3 Inverted Microscopy observation of OECs at day 7after purification (×200). The purified cells displayed thetypical spindle-shaped bi- to tripolar morphology of OECs.
圖4 OECs 純化后14d P75 NGFR DAB 染色(×100)
Fig. 4 Immunocytochemical staining of OECs withanti-NGFR P75. On the twelfth day in vitro, the cells extendedunanimously and grew in parallel directions. The purity ofOECs was determined according to immunostaining positivelyfor P75 was 85%.
3.3 IKVAV 多肽材料與OECs 的生物相容性檢測復合培養7 d 和12 d 的OECs 經Calcein-AM/PI染色后, 激光共聚焦顯微鏡下觀察發現活細胞發出綠色熒光, 死細胞發出紅色熒光, IKVAV 多肽包被的蓋玻片與多聚賴氨酸包被的蓋玻片活細胞數所占比例均為95%以上(圖5~8)。圖5 OECs 與IKVAV 復合培養7 d (×100)Fig. 5 OECs cultured with IKVAV for 7 days (×100).圖6 OECs6 與PLL 復合培養7 d (×100)Fig. 6 OECs cultured with PLL for 7 days (×100).
圖7 OECs 與IKVAV 復合培養12 d (×100)Fig. 7 OECs cultured with IKVAV for 12 days (×100).
圖8 OECs 與PLL 復合培養12 d (×100)Fig. 8 OECs cultured with PLL for 12 days (×100). The cellviabilities in Figs. 5–8 were determined by the calcein-AM/PIdouble-staining method. The Calcein-AM stained the living cellsonly (Green), while the PI stained the nucleus of the death cell(Red). At 7 or 12 days, the percentages of living cells in bothIKVAV and PLL group are more than 95%.296 ISSN1000-3061 CN11-1998/Q Chin J Biotech February 25, 2009 Vol.25 No.2Journals.im.ac.cn\表1 各組接種OECs 3 d, 7 d 的吸光值(n=8, x ±s)Table 1 The mean value of absorbance at 3 and 7 days (n=8, mean ± S.E.M.)A Group B Group C Group D Group E Group F Group3 d 0.426±0.041 0.401±0.034 0.417±0.049 0.389±0.055 0.441±0.044 0.409±0.0587 d 0.903±0.064 0.887±0.059 0.873±0.047 0.905±0.071 0.896±0.060 0.900±0.061At 3 and 7 days, the mean value of absorbance in each of the experimental group was not significant higher than that in control group(A Group) (P>0.05).3.4 IKVAV 多肽對OECs 增殖的影響各組接種OECs 后分別于3d、7d 加入CCK-8,酶標儀測吸光度值結果如表1 所示, 各組吸光度值差異在兩時間點均無統計學意義, 說明上述各濃度的IKVAV 多肽溶液對OECs 增殖無毒性作用。3.5 IKVAV 多肽對OECs 的粘附率的影響8 h、13 h 和18 h 三個時間點C 組和A 組相比P值均小于0.05, 具有顯著性差異。23 h 時因為細胞黏附率都已大于60%各組均無顯著性差異。圖9 能很好的說明20 mg/L 的IKVAV(C 組)能有效地促進OECs 的黏附。圖9 A、C、G 組各時間點OECs 的黏附曲線Fig. 9 A, C, G Group’s adhesion curve of OECs at 8、13、18、23 hours. C Group compared with A Group, IKVAV atconcentrations of 20 mg/L promoted the adhesion of OECs(P<0.05).
3 討論
本實驗中IKVAV 兩親性分子序列[6,8] 為:
C16H31O-NH-AAAGGGEIKVAV-COOH, 該序列中C16H31O 是疏水性的, 使分子聚集, 而且含有長鏈的烷基尾C16H31O, 該結構可提高肽對氫離子敏感度。烷基尾逐漸縮短到無烷基尾時肽對氫離子觸發的自組裝能力下降最終不能自組裝成凝膠。序列中A3G3(-AAAGGG-)。一方面與烷基起協同效應, 另一方面使其后部的活性區域IKVAV 伸出到纖維表面, 從而暴露IKVAV 的活性區域。E 為親水性, 使分子離散。當pH 值>9 時, 肽帶負電荷, 由于靜電排斥阻止其自組裝, 當pH 值<8.5, 肽負電荷排斥作用消失, 疏水基團聚集。聚集的多肽分子會有規律地自組裝, 形成輪輻樣結構, 親水的C 端IKVAV 活性多肽位于結構表面, N 端疏水的多肽和烷基鏈位于結構內部[12]。同樣加入二價陽離子(如Ca2+)后, 帶負電荷的肽可通過與陽離子之間的橋梁作用發生聚集,有利于自組裝凝膠形成。該肽在常溫下加入DMEM/F12 后, 在氫離子和二價陽離子的觸發下形成疏松質軟的凝膠。本實驗通過AFM 觀察證實該凝膠材料是編織狀納米纖維, 纖維直徑為3~5 nm, 長度可達到數百納米, 纖維之間有一定空隙, 可容納細胞和水分子, 在結構上是一種類似于天然細胞外基質的仿生材料。本實驗將OECs 種植在IKVAV 納米自組裝凝膠
基質材料上培養, 可見OECs 生長良好, 分布均勻,細胞活性良好, 活細胞占細胞總數95%以上, 同時IKVAV 多肽納米材料對OECs 的增殖沒有抑制作用,表明IKVAV 多肽具有良好的生物相容性。在粘附實驗中發現IKVAV 多肽能夠促進OECs的粘附, 合適濃度的IKVAV 的粘附能力強于多聚賴氨酸。現在IKVAV 材料促進OECs 黏附的具體機制尚不清楚, 可能其促進OECs 黏附的作用是IKVAV和OECs 表面表達的層粘連蛋白共同作用的結果,但是較大濃度的IKVAV-PA 可能會抑制OECs 自身層粘連蛋白的表達, 從而降低其黏附性。理想的脊髓組織工程支架材料應滿足以下幾個要求: 1) 良好的生物兼容性, 在體內不會引起排斥和炎癥反應。2) 具有可塑性和三維立體結構, 是高度多孔的類似泡沫狀, 具有很大的內表面積。有利于細胞以及相關基質分子的植入和黏附, 同時還有利于細胞營養成分的滲入和代謝產物的排出。3) 具徐會法等: 自組裝IKVAV 多肽納米纖維支架凝膠及其對嗅鞘細胞的作用 297Journals.im.ac.cn有良好的表面活性, 能促進細胞的黏附并提供良好的細胞外微環境。4) 具有生物可降解性及適宜的降解速率[10]。本實驗合成的IKVAV, 具有以下特性: 1) 位于層粘連蛋白α1 鏈長臂的羧基末端, 是層粘連蛋白的α1 鏈中的核心五肽功能片段, 有很好的生物活性[11,12]; 2) 無免疫原性; 3) 生物降解性能好, 降解后的產物為氨基酸, 可作為組織修復的原料; 4) 可形成三維的更高級結構如圖10 所示該肽在常溫下加入DMEM/F12 后.在氫離子和二價陽離子的觸發下形成疏松質軟的納米纖維支架凝膠; 5) 具有活性區域, 可作為結合細胞膜表面的配體; 6) 易獲取或人工設計; 7) 觸發形成凝膠條件簡單, 如可為HCl, 生理鹽溶液等; 8) 反應條件簡單, 在常溫下進行反應, 時間快, 僅需數秒鐘即可完成; 9) 肽序列可根據需要進行修改; 10) 對細胞的增殖無毒副作用, 并且能促進細胞的黏附。完全合乎上述要求。近年來嗅鞘細胞被認為是最有前景在SCI 治療取得突破的移植細胞, 因為其具有以下優點: 1) 可以誘導神經軸突的再生和中樞神經軸突的髓鞘再生
雙重作用, 促進神經功能的恢復[13]; 2) OECs 移植后所創造的微環境能抑制空洞形成和瘢痕增生, 刺激感覺、運動軸突長入損傷區域, 并且作為一種具有中樞神經系統星形膠質細胞和外周神經系統雪旺氏細胞特性的獨特細胞類型, 嗅鞘細胞在正常情況下也存在于中樞神經系統內, 與中樞神經的整合與在其內的遷移是自然的, 也就使得嗅鞘細胞所形成的支架橋梁—神經膠質橋, 能夠穿越再生軸突無法通過的膠質瘢痕, 達到相應的靶點, 恢復損傷的神經功能[14]; 3) 在脊髓實質內遷移的能力[15]; 4) 嗅鞘細胞在其膜上表達出很多與細胞粘合和軸突生長相關的分子, 如凋控嗅神經軸突延長的Ll、PSA-N-CAM、N-CAM、laminin、fibronectin, 促進神經生長因素的分子-源自于膠質細胞的nexin 和S100。嗅鞘細胞能分泌大量不同種類的神經營養和支持因子, 如血小板源生長因子、神經肽Y、S100、神經生長因子、腦源性神經營養因子、神經營養因子一3 和神經營養因子-4 等[16]為再生神經建立了很好的內環境。IKVAV 多肽納米纖維凝膠復合的神經組織工程假體包裝OECs 形成復合體后OECs 位于IKVAV 多肽納米纖維凝膠的空隙內, 移植到損傷脊髓局部后具有以下作用: 1) 可以防止OECs 被血流沖散。2)可以提供相對穩定的內環境以利于OECs 的生長。3) 納米纖維可以為OECs 的突起生長提供支架, 當納米纖維分解時可以誘導OECs 的突起向遠處生長。4) 合適濃度的IKVAV 能有效地促進OECs 的黏附有
利于OECs 的生長。本實驗從細胞移植治療脊髓損傷的3 個內容(種子細胞, 支架材料和各種生長因子提供的內環境)出發, 從各個方面為損傷脊髓的修復提供物質基礎。納米纖維凝膠材料IKVAV 多肽對OECs 的生物活性沒有影響, 并可促進OECs 的粘附, 是一種優良的神經組織工程支架材料。OECs 與IKVAV 多肽納米纖維凝膠復合的神經組織工程假體的形成結合了二者
的優點, 并且OECs 表面表達的分子和分泌的多種因子為神經再生提供了良好的內環境, 所以OECs與IKVAV 多肽納米纖維凝膠復合的神經組織工程假體在脊髓損傷的治療應用中必將有廣闊的應用前景。
REFERENCES
[1] Nomura H, Tator CH, Shoichet MS. Bioengineeredstrategies for spinal cord repair. J Neurotrauma, 2006,
23(3-4): 496?507.
[2] Tysseling-Mattiace VM, Sahni V, Niece KL, et al.Self-assembling nanofibers inhibit glial scar formation and
promote axon elongation after spinal cord injury. JNeurosci, 2008, 28(14): 3814?3823.
[3] Anderson DG, Burdick JA, Langer R. Materials science.Smart biomaterials. Science, 2004, 305(5692): 1923?1924.
[4] Saha K, Irwin EF, Kozhukh J, et al. Biomimetic interfacialinterpenetrating polymer networks control neural stem cellbehavior. J Biomed Mater Res A, 2007, 81(1): 240?249.
[5] Heller DA, Garga V, Kelleher KJ, et al. Patternednetworks of mouse hippocampal neurons on peptidecoatedgold surfaces. Biomaterials, 2005, 26(8): 883?889.
[6] Niece KL, Hartgerink JD, Donners JJ, et al. Self-assemblycombining two bioactive peptide-amphiphile moleculesinto nanofibers by electrostatic attraction. J Am Chem Soc,
2003, 125(24): 7146?7147.
[7] Wei YT, Tian WM, Yu X, et al. Hyaluronic acid hydrogelswith IKVAV peptides for tissue repair and axonalregeneration in an injured rat brain. Biomed Mater, 2007,
2(3): S142?S146.
[8] Wu YC, Zheng QX, Wu B. et al. Self-assembled IKVAVnanofibers and its effects on neural stem cells. Chin J ExpSurg, 2006, 23 (11): 1398?1400.
吳永超, 鄭啟新, 吳斌, 等. 異亮氨酸-賴氨酸-纈氨酸-
298 ISSN1000-3061 CN11-1998/Q Chin J Biotech February 25, 2009 Vol.25 No.2Journals.im.ac.cn
丙氨酸-纈氨酸多肽納米纖維對神經干細胞生物學行為
的影響. 中華實驗外科雜志, 2006, 23(11): 1398?1400.[9] Hu ZJ, Ma YH, Zhou CJ, et al. Morphology andphenotype of rat olfactory ensheathing cells harvested byenzyme digestion. Chin J Clin Rehabil Tissue Eng Res,2007, 11(20): 3892?3895.
胡志俊, 馬迎輝, 周重建, 等. 酶消化法體外分離培養
的大鼠嗅鞘細胞形態及表型特征. 中國組織工程研究
與臨床康復, 2007, 11(20): 3892?3895.[10] Hurtado A, Moon LD, Maquet V, et al. Poly (D,L-lactic
acid) macroporous guidance scaffolds seeded withSchwann cells genetically modified to secrete a
bi-functional neurotrophin implanted in the completelytransected adult rat thoracic spinal cord. Biomaterials,2006, 27(3): 430?442.
[11] Almi?ana N, Grau-Oliete MR, Reig F, et al. In vitroeffects of SIKVAV retro and retro-enantio analogues ontumor metastatic events. Peptides. 2004, 25(2): 251?259.[12] Silva GA, Czeisler C, Niece KL, et al. Selectivedifferentiation of neural progenitor cells by high-epitopedensity nanofibers. Science, 2004, 303(5662): 1352?1355.
[13] Kubasak MD, Jindrich DL, Zhong H, et al. OEGimplantation and step training enhance hindlimb-steppingability in adult spinal transected rats. Brain, 2008, 131( Pt1): 264?276.
[14] Dombrowski MA, Sasaki M, Lankford KL, et al.Myelination and nodal formation of regenerated peripheralnerve fibers following transplantation of acutely preparedolfactory ensheathing cells. Brain Res, 2006, 1125(1): 1?8.[15] López-Vales R, Forés J, Navarro X, et al. Chronictransplantation of olfactory ensheathing cells promotespartial recovery after complete spinal cord transection inthe rat. Glia, 2007, 55(3): 303?311.[16] Deng C, Gorrie C, Hayward I, et al. Survival andmigration of human and rat olfactory ensheathing cells inintact and injured spinal cord. J Neurosci Res, 2006, 83(7):
1201?1212.
科學出版社科學出版中心生命科學分社新書推介
植物病害流行學(原書第二版)(譯)
〔愛爾蘭〕B.M.庫克〔英國〕D.加雷思? 瓊斯〔愛爾蘭〕B.凱 編著
王海光 馬占鴻 主譯
978-7-03-022630-3 ¥86.00 2008 年12 月 出版
本書是Springer 出版的植物病害流行學英文材料The Ep idemiology of Plant Diseases
(Second Edition)的中譯本。內容基本包括了植物病害流行學的方方面面,主要涉及病害診斷、
病害評估和產量損失、病原毒性和抗蘊含性變異、病原真菌侵染略、植物抗病性、病原傳播、
病原群體動態、病害流行時間動態的模擬與分析、病害檢測、病害流行控制策略等,并且介紹
了各種傳播方式病害以及具體的馬鈴薯疫病、蘋果黑星病、洋蔥病害、烏干達木薯花葉病的流
行研究動態等。根據學科發展,本書介紹了很多最新的研究內容,如信息技術、分子生物學、
大氣科學等在病害流行學中的應用,便于讀者了解植物病害流行學最新理論和方法技術。
本書可作為植物病理專業研究學習植物病害流行學的教材,也可作為植保專業本科生學習植物病害流行學的參考
教材,還可作為從事植保及相關研究和管理人員的參考用書。
歡迎各界人士郵購科學出版社各類圖書(免郵費)
郵購地址:北京東黃城根北街16 號 科學出版社 科學出版中心 生命科學分社 郵編: 100717
聯系人:阮芯 聯系電話:010-64034622(帶傳真)
更多精彩圖書請登陸網站//www.lifescience.com.cn

版權所有 上海波泰生物科技有限公司 多肽合成 滬ICP備05018319號
聯系電話:86-21-64975089、54360855、64705880?電子信箱:[email protected][email protected]


??| 多肽修飾 | 高通量多肽合成 | 全自動多肽合成儀 | 客戶發表的多肽論文 |??
在線客服
有事點這里